七百六十八.禍首

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此外，B細胞似乎在不同的癌症和亞型中分佈不均，而這些癌症和亞型是整個癌症免疫系統的重要組成部分。例如，B細胞在食管鱗狀細胞癌()和中的浸潤程度低於結腸癌(COAD)和皮膚黑色素瘤(SKCM)。一項頭頸部鱗狀細胞癌()免疫景觀研究顯示，HPV+富含更多的GCB細胞，而被更少的B細胞浸潤，包含更多的pc或切換的MBCs，這可能是由於缺少CD4+Tfh細胞。然而，在一項關於非小細胞肺癌的研究中，相鄰區域的B細胞富集量大於腫瘤區域，這可能與炎性細胞浸潤有關。除了橫向尺寸外，tilb的組成在腫瘤的縱向進展過程中也會發生變化，促進或抑制腫瘤的發展。早期CRC腫瘤中的B細胞最可能是表達腫瘤抑制因子的pre-B樣細胞，而在晚期CRC腫瘤中，它們往往是pc。與原發性結直腸癌相比，肝轉移灶中B細胞明顯減少，可見免疫抑制TME。Na?ve-like在晚期NSCLC中B細胞減少，PCs增加，提示預后不良。在肝硬化患者中觀察到體液免疫基因(如IGHG1)的表達增加，這表明在腫瘤形成前體液免疫的代償性增加。因此，當體液免疫基因表達突然降低時，可能存在發生腫瘤的風險。

到目前為止，許多癌症的單細胞免疫譜已經被繪製出來，如黑色素瘤、乳腺癌、肺癌和大腸癌，但它們主要集中在T細胞或MDSCs。泛癌的單細胞研究關注的是T細胞的異質性和功能，而不是B細胞，因為它們在TME中的數量較高。然而，B細胞作為適應性免疫的重要組成部分，由於其所佔比例小，往往被忽視，這也是腫瘤免疫譜中缺失部分的原因。此外，不同分子亞型B細胞的差異性以及腫瘤發展過程中的動態變化，使得研究者需要對B細胞進行橫向和縱向的研究，這在目前的研究中也是缺乏的。特別是在免疫治療的研究中，需要從多個時間點採集樣本，動態監測B細胞，觀察治療反應。

腫瘤中的B細胞亞群

通常，根據分化過程，B細胞可分為幼稚B細胞、MBCs和ASCs，它們在TME中各有不同的表型和功能(表2)。在繪製癌症免疫細胞圖譜時，由於特定癌症中B細胞的比例較低，通常將其分為CD19+CD20+B細胞和CD138+SDC1+PC。針對TIL-B的scRNA-seq分析將這些細胞的尺寸降低到更高的解像度，導致了更不同的B細胞群體。MBC通常分為交換式MBC(IGD-)和非交換式MBCS(IGD+)。此外，ASCs還可分為PC(CD138+)和漿母細胞(PBS)(CD138-)。依靠scRNA-seq平台，某些亞群還可以通過其高表達的特定基因來確定，而不是傳統的B細胞分類。例如，濾泡B細胞(CD19+CD20+)，GCB細胞(LRMP+CD38+)，活化B細胞(CD71+CD10-Ki67+)和干擾素誘導的B細胞(IFITM1+IFI44L+)。

綜上所述，不同腫瘤中B細胞亞群的客觀多樣性和單細胞分析的主觀個體化方法共同導致了TIL-B亞群定義的多樣性。因此，對符合研究目的的B細胞進行適當而準確的定義，對研究人員提出了更高的生物學知識水平。

三級淋巴結構

TLS是位於腫瘤核心或邊緣區域的淋巴細胞聚集，主要包括具有FDC的GC和具有成熟DC的T細胞區。TIL-B被APC和TFH細胞誘導分化，介導抗腫瘤功能，實現原位腫瘤破壞(圖3)。由於TLS在抗原呈遞、激活B細胞、增加細胞因子信號和促進腫瘤相關抗體釋放方面的重要性，TLS對免疫反應的作用非常顯著。在幾項研究中，TLS已被證明與黑色素瘤患者、肺癌患者和乳腺癌患者的生存率呈正相關。有趣的是，腫瘤附近發炎區域的TLSS可能會促進某些癌症的轉移和複發。TLS的定位方法主要依賴於Hamp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;E和IHC，包括TLS相關標記物CD19CD20、CD3、DC-MP、CXCL13和CCR5。ScRNA-seq為檢測TLS的抗腫瘤功能提供了更深層次的洞察力，突出了功能性B細胞亞群及其與其他細胞的合作在結構中產生和維持記憶和效應性抗腫瘤反應的關鍵作用。

Helmink等人對黑色素瘤新輔助ICB試驗隊列中的1760個B細胞進行分類，得出結論：TLS的存在與ICB的反應密切相關，可能是總體存活率較高的標誌。與無應答者相比，應答者從基線開始有更豐富的B細胞浸潤，這具有預測意義。此外，與無應答者相比，應答者的克隆計數和BCR多樣性增加。值得注意的是，另一項黑色素瘤隊列研究發現，TLS中的T細胞主要是CD4+T細胞，而不是CD8+T細胞，CD8+T細胞經歷了抗原呈遞並表達了生存分子bcl-2。因此，TLS結合CD8+T細胞的存在可能是預測這些患者的免疫反應和總存活率的最好標記物。

此外，Petitprez等人建立了基於TME的肉瘤免疫分類，發現E級(即免疫群體尤其是B系的高表達)患者對ICB的反應最好，存活率也最高。一個普遍的現象是，TLS豐富的腫瘤有更多的CD8+T細胞浸潤。一個可能的解釋是B細胞指導CD8+T細胞識別腫瘤新抗原。這些CD8+T細胞可以被預耗盡和PD-1+，這使得ICB在這些富含TLS的腫瘤中發揮作用。總之，TLS是ABC和CD8+T細胞產生抗腫瘤免疫的地方，它可以將免疫抑制的腫瘤轉化為免疫原性的腫瘤，從而為ICBS創造了最大限度發揮抗腫瘤作用的機會。因此，通過靶向腫瘤血管的光等細胞因子結合免疫治療來誘導TLS可能會延長患者的生存期。

記憶B細胞

根據MBCs與Tfh細胞相互作用過程中是否發生CSR，將MBCs分為非交換MBCs(IgD+)和交換MBCs(IgD-)。在一些自身免疫性疾病中檢測到雙陰性MBs(CD27-IgD-)最近在NSCLC中發現，並與切換的MBCs數量呈負相關，可能是耗竭B細胞亞型。值得注意的是，在人類TNBC組織中，IGH譜系分析顯示CD27-非典型MBs具有最高的簇內多樣性，提示更多的SHMs。也有報道稱，雙陰性TIL-B的數量與Treg細胞表型(FoxP3+CD4+TILs)和低生存率有關。到目前為止，關於CD27-IgD-B細胞在TME中的分化和生成過程及其功能尚不清楚。

非交換MBC也被稱為早期儲存或GCB細胞，它們沒有經歷CSR，有潛力分化為傳統MBs或長壽PCs。在GC中，非開關MBs向Tfh細胞提供MHCII肽並促進其成熟。Lu等人在人乳腺癌組織中發現了新輔助化療后出現的+CD20+CD27+IgD+B細胞亞群。利用B細胞特異性缺失小鼠，發現B細胞中的通過誘導T細胞活化增強抗腫瘤免疫能力。同樣，在NSCLC樣本中觀察到TIL-Bs(CD19+CD20+CD27+CD21+)的抗原呈遞功能，它們的數量與效應T細胞應答相關[88]。作為體液免疫的候選細胞，轉換單核細胞具有強大的抗腫瘤功能，因為它們能夠通過抗原特異性記憶分化為分泌抗體的pc。在一個黑色素瘤隊列中，應答者的腫瘤顯示出明顯更高的MBCs浸潤，而非應答者的B細胞主要是na?veB細胞，這突出了MBCs在誘導ICB應答中的作用。Wiend等人從HPV+患者中分離出三組B細胞，並將其中一組ABCs定義為CD19+CD20+IgDCD71+CD10。在TME、PBMC、轉移淋巴結中可見大量ABC浸潤，提示ABC介導持久抗原特異性體液免疫。在原發性CRC患者中，術前化療后，一種免疫共刺激和MHC分子上調的活化免疫激活型B細胞取代了先前活化程度較低的B細胞。PDAC患者在疾病進展的早期有浸潤的開關型MBCs顯示了長期生存。值得注意的是，在TME中對MBCs的探索主要集中在它們的兩種主要功能，抗原呈遞和抗原特異性記憶，這兩種功能允許體液免疫和細胞免疫的結合。然而，大多數研究集中在MBCs組，而不是更詳細的分類，這忽略了亞組之間的不同功能。

抗體分泌細胞

ASC可分為PBS和PC。GC細胞致力於分化為PC，下調CD23表達和IL-4信號，並發展為Pre-Pbs以適應其新的分泌功能。PBS指的是GC后B細胞和具有增殖和產生抗體能力的成熟PC之間的短暫分化。然而，有證據表明，在GC-T區的早期階段也產生了PBS，並在GC的選擇過程中介導了反饋調節。經過SHM和CSR后，對腫瘤相關抗原具有高親和力的GCB細胞最終分化為成熟的PC，產生IgG、IgA、IgM和IgE，提供特定的功能。到目前為止，GCs如何調節PBS和PC的輸出的機制仍然不清楚。

在人類黑色素瘤隊列中，Griss等人發現了CD20和CD19降低的亞群，並上調了CD38，CD38被定義為表達CD27，CD38和PAX5基因的類似PB的群體。ScRNA-seq分析顯示，這一亞群與抗PD-1治療有更好的反應和更長的總生存期。在HPV+患者中，在TME中觀察到HPV特異性ASCs，提示存在原位和抗原特異性應答。然而，ASCs與腫瘤細胞之間的關係並不簡單，這在很大程度上取決於它們分泌的免疫球蛋白以及免疫球蛋白與各種腫瘤細胞類型之間的相互作用。

腫瘤相關抗體主要為IgA和IgG。通常，在各種癌症中，腫瘤內IgA的高表達與結直腸癌和膀胱癌等癌症患者的生存率較低有關。一個可能的解釋是，IgA與Breg細胞的表型有關，Breg細胞促進Treg細胞的形成，而Treg細胞又通過釋放轉化生長因子-β(TGF-β)促進IgA+B細胞的轉換。然而，最新證據證實IgA在卵巢癌中具有抗腫瘤作用，它與卵巢癌細胞表面普遍表達的聚合IgA受體(PIgR)結合。免疫球蛋白可修復髓樣細胞對抗細胞外致癌因子，並使惡性腫瘤細胞對CD8+T細胞的細胞殺傷敏感。因此，以IgA和IgA分泌細胞為靶點的免疫治療可能是治療pIgR+粘膜腫瘤的有效途徑。

IgG通過其在、CDC、ADCP中的多種功能以及APC促進抗原表達而與抗腫瘤B細胞活性密切相關。然而，最近的研究發現，TME中高IgG與生存不良有關，與更具侵襲性的病理特徵有關，與CD8+T細胞低浸潤有關。在乳腺癌中，原發腫瘤教育的B細胞可以聚集在腫瘤引流淋巴結中，並分泌致病的IgG，以糖基化的膜蛋白HSPA4為靶點促進淋巴結轉移。然而，這一爭議可能是由於不同的IgG亞型所致。在肺腺癌中，IgG1和IgG4的比例與非沉默突變負荷呈正相關，這突出了抗原提呈和直接殺傷腫瘤細胞的作用。此外，IgG1高浸潤與黑色素瘤患者和KRAS突變肺腺癌患者存活率較高有關。相反，RNA測序數據表明IgG3促進黑色素瘤的發展，這可能是因為IgG3介導的體液反應是短暫的和早期的，SHM率和親和力都很低。另一種可能的解釋是，單體IgG3與表達於巨噬細胞和自然殺傷細胞上的FcγR有很高的親和力，這與其他亞型不同。因此，非特異性IgG3與這些細胞上空置的Fcγ受體結合，從而停止它們與腫瘤細胞表面結合的腫瘤特異性細胞毒抗體的相互作用。IgG4還削弱了IgG1介導的抗腫瘤免疫，並促進了黑色素瘤的炎症。然而，使用腫瘤特異性抗體比使用非特異性自身抗體更能保證患者的生存，而且促進TME中IgG產生的細胞因子或趨化因子可能會抑制T細胞的分化或細胞毒功能。因此，抗體的抗腫瘤或促腫瘤作用不僅取決於其生物學特性，還取決於TME中各種細胞和細胞因子的相互作用，更注重從單細胞角度探索TME的複雜網絡。

B和T細胞

B細胞和T細胞作為最好的合作夥伴，共同作用，相互調節和分化，這表現為大量B細胞和T細胞共滲到TLS結構中(圖3)。沒有成熟B細胞的Jh小鼠CD4+和CD8+T細胞減少，Treg細胞表型增加。在卵巢癌的單細胞分析中，T細胞浸潤越多的樣本，TME中浸潤的明顯B細胞簇越豐富。CRC和TNBC的單細胞分析也證實了濾泡B細胞和T細胞之間的相互作用。在乳腺癌和卵巢癌中也獲得了類似的結果，這表明TIL-B可能與T細胞一起在抗腫瘤免疫中發揮作用。然而，許多scRNA-seq研究僅僅關注這一現象，但其相互關係的原理還需要在體內和體外進一步評估。